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                大鼠熱休克60(Hsp-60)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
                更新時間:2015-08-17   點擊次數(shù):1587次

                大鼠熱休克60(Hsp-60)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
                本試劑盒僅供研究使用。
                檢測范圍:96T
                1.5ng/L -50ng/L
                使用目的:
                本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中熱休克60(Hsp-60)含量。
                實驗原理
                本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠熱休克60(Hsp-60)。用純化的大鼠熱休克克60(Hsp-60)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入熱休60(Hsp-60),再與 HRP標(biāo)記的熱休克60(Hsp-60)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并60(Hsp-60)呈正相關(guān)。在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的熱休克用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠熱休克60(Hsp-60)濃度。
                試劑盒組成
                30倍濃
                20ml×1瓶
                6ml×1瓶
                12孔×8條
                6ml×1瓶
                6ml×1瓶
                6ml×1/瓶
                終止液
                6ml×1瓶
                0.5ml×1瓶
                1.5ml×1瓶
                1份
                2   酶標(biāo)試劑
                標(biāo)準(zhǔn)品(96ng/L)
                標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                3   酶標(biāo)包被板
                4   樣品稀釋液
                5   顯色劑 A液
                6   顯色劑 B液
                10   說明書
                11   封板膜
                12   密封袋
                2張
                1個
                標(biāo)本要
                1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
                2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過(HRP)活性。
                操作步驟大鼠熱休克60(Hsp-60)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
                1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
                48ng/L
                24ng/L
                12ng/L
                6ng/L
                5號標(biāo)準(zhǔn)品
                4號標(biāo)準(zhǔn)品
                3號標(biāo)準(zhǔn)品
                2號標(biāo)準(zhǔn)品
                1號標(biāo)準(zhǔn)品
                150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                150μl的  5號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                150μl的  4號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                150μl的  3號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                150μl的  2號標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
                3ng/L
                2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

                溫育:用封板膜封板后37℃溫育30分鐘。20倍稀釋后備用
                配液:將 20倍濃
                洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復(fù) 5次,拍干。30秒后棄去,如此
                加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
                溫育:操作同 3。
                洗滌:操作同 5。
                顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
                10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
                11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
                操作程序總:
                計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

                注意事項大鼠熱休克60(Hsp-60)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
                1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
                2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響。
                3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
                4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
                5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉
                6.底物請避光保存。
                7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗。
                8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
                9.本試劑不同批號組分不得混用。
                保存條件及有效期
                1.試劑盒保存:;2-8℃。
                2.有效期:6個月

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