目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。這樣做的目的，所以有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。其次，主要是為了在后面，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以知足測定要求。
再如治療藥物的檢測，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對較短。使用微量加樣器加樣必需留意的樞紐點(diǎn)是：ELISA試劑盒加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要留意收集時(shí)間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。
結(jié)果判定和結(jié)果講演及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會影響測定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。濺出會對臨近孔產(chǎn)生污染。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響。ELISA試劑盒作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相長進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必需在一定的溫度前提下反應(yīng)一定的時(shí)間。
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