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                影響ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)成果的原因
                更新時(shí)間:2018-03-23   點(diǎn)擊次數(shù):1747次

                ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對實(shí)驗(yàn)的檢測作用影響較大,如不留意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。
                將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟示,進(jìn)步實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
                下面剖析Elisa實(shí)驗(yàn)操作中可能影響成果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法
                一、挑選試劑
                挑選質(zhì)量的檢測試劑,嚴(yán)厲依照試劑闡明書進(jìn)行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
                二、 孵育
                可能原因:
                1) 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸騰,吸附于孔壁,難于清洗*; 2) 孵育時(shí)刻人為延伸,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。
                解決辦法:
                1) 貼封片或加蓋; 2) 按闡明過程嚴(yán)厲控制操作時(shí)刻。
                三、洗板
                可能原因:
                1) 選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。 2) 選用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板作用差。 3) 反響板過多形成洗板等候時(shí)刻長。
                解決辦法:
                1) 確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選干凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; 2) 合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
                四、加樣
                可能原因:
                1)血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣; 2)手藝操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時(shí)刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)); 3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。
                解決辦法:
                1)標(biāo)本為血清:將血液先天然寄存1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:有必要使用含抗凝劑的血液標(biāo)本搜集管,采血后有必要當(dāng)即倒置采血管混合5-10次,放置一段時(shí)刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲(chǔ)存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板外表輕拭吸干。 4)如果選用AT或其他全自動(dòng)加樣,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5)標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。

                 

                上海晶抗生物工程有限公司
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