自從Engvall和Perlman(1971)報(bào)道建立ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays， ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒))以來(lái)，由于ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，
酶聯(lián)免疫試劑盒具有快速、敏感、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用 。 盡管早期的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)由于特異性不夠高而妨礙了其在實(shí)際中應(yīng)用的步伐，但隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，尤其是采用基因工程方法制備包被抗原，采用針對(duì)某一抗原表位的單克隆抗體進(jìn)行阻斷ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)試驗(yàn)，都大大提高了ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。
酶聯(lián)免疫試劑盒的特異性，加之電腦化程度*的ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測(cè)儀的使用，使ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)更為簡(jiǎn)便實(shí)用和標(biāo)準(zhǔn)化，從而使其成為*泛應(yīng)用的檢測(cè)方法之一。
酶聯(lián)免疫試劑盒的基本原理如下：
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免疫學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。
滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
此種顯色反應(yīng)可通過ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。
用于標(biāo)記的酶 用于標(biāo)記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩(wěn)定;反應(yīng)產(chǎn)物易于顯現(xiàn);能商品化生產(chǎn)。目前應(yīng)用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應(yīng)用*。
